96孔細胞培養(yǎng)板使用與維護方法

以下是關于96孔細胞培養(yǎng)板使用與維護方法的專業(yè)指南：

一、細胞接種操作規(guī)范

細胞預處理‌

選擇狀態(tài)良好的細胞(瓶底密度80%為佳)，消化時先用PBS或無血清培養(yǎng)基沖洗‌

使用0.25%胰酶消化2-3分鐘，不同細胞類型需調(diào)整時間‌

終止消化后需吹打成單細胞懸液(建議用培養(yǎng)基稀釋而非血清)‌

　　接種技巧‌

每孔加入100μL細胞懸液，從孔左側底部緩慢加樣‌

加完半板后需重新混勻懸液再繼續(xù)加樣‌

加樣后輕敲培養(yǎng)板四邊(順時針方向敲擊3次/邊)‌

二、培養(yǎng)環(huán)境控制

邊緣效應處理‌

? 周邊孔建議填充PBS或培養(yǎng)基作為緩沖，避免用于關鍵實驗‌

? 新型培養(yǎng)板(如Nunc Edge)可通過蒸發(fā)溝槽設計消除邊緣效應‌

溫濕度管理‌

? 換液時需預溫培養(yǎng)基(37℃預熱10分鐘)防止細胞脫落‌

? 觀察細胞時需注意培養(yǎng)板蓋霧氣干擾(可短暫靜置除霧)‌

三、日常維護要點

操作環(huán)節(jié) 注意事項

換液操作‌ 沿孔壁緩慢加液，使用剪尖槍頭避免沖力過大‌

滅菌處理‌ 聚苯乙烯材質(zhì)耐受γ射線滅菌，但不可高壓滅菌(最高耐溫80℃)‌

儲存條件‌ 未開封產(chǎn)品需避光干燥存放(15-25℃)，已開封需密封防污染‌

四、特殊應用提示

成像實驗‌：選擇底部光學性能優(yōu)異的型號(如ibidi μ-Plate折射率1.52)‌

長期培養(yǎng)‌：每48小時需更換培養(yǎng)基，避免代謝廢物堆積‌

注：細胞密度建議控制在0.5-2×10?/孔，具體需根據(jù)細胞類型調(diào)整‌

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